显微镜的调试方法

为了使显微镜的视野能受到均匀而又充分的照明，在显微镜初次安装和调试时，就必须把照明光路系统调整好，这是正确使用显微镜，并获得正确、可观结果的重要手段和*基本的要求。此外，正确掌握照明光路系统的调整，是使用显微镜过程中更换光源灯泡后所必经的步骤，也是在日常使用过程中不时地检验显微镜性能的必要手段。显微镜照明光路系统的调整主要有以下4项内容：

1．照明光源灯室在显微外的初步调整
① 首先将灯室的外壳打开，压弹簧夹子将卤素灯泡装入插座中，安装时避免手指直接接触灯泡（可用柔软的布或纸隔住），以免灯泡上留有指纹等脏物，影响灯泡的使用寿命。
②把灯室摆在桌面上，接通电源后，用专用的螺丝刀调节灯的调焦旋钮孔（标有“←→”），使灯丝投影在1-2m外的墙上，将灯丝成像调至清晰；然后调节灯的高低位置调节丝孔（标有“──”），使灯丝位置高低适当；再调节灯的左右位置调节螺丝孔（标有“──”），使灯丝左右位置合适。


2．光源发光体（灯丝）在显微镜内位置的检验和校正，目的是为了把发光体的像端端正正地调入物镜的视域范围内，从光源的角度去确保显微镜的视域受到充分而均匀的照明，这是调整柯勒照明系统的前提条件。需要的基本工具：对中望远镜购置显微镜时已配备。
① 拔掉灯库内的毛玻璃套筒，把灯室装回显微镜上
②选用10×物镜，开亮光源程序找样品并调焦清晰，再换用40×物镜把样品调焦清晰（40×物镜可以看清灯丝的全貌）；
③把聚光镜的孔径光阑和视场光阑均开到*大；
④拔掉其中一个目镜，换上对中望远镜，抓住白色部分，另一手伸缩黑色接目镜，就可在视野中看到灯丝像；
⑤如灯丝位置不合适，调“──”孔，把灯丝像沿水平方向调好，调“──”孔，把丝像沿垂直方向调好，直至将灯丝像调至刚好充满物镜孔径的光圆像；
⑥调整完毕后，将毛玻璃套筒插回原位，拔掉对中望远镜，换回目镜作下一步调整。以上所述照明光源灯室在显微镜外的调整和光源发光体在显微镜内位置的校验，只需在显微镜初次安装调试及更换灯泡时进行，平时使用显微镜时不能随意乱调乱动。万一调乱时，可按上述步骤调回原状。


3．柯勒照明（Kohler）系统的正确调整　显微镜的正确调试，主要工作之一是照明光路系统的调整，而其中的关键是柯勒照明系统的调整。对于每一位使用显微镜的人员，特别是作显微照像的人员来说，应该对柯勒照明系统的原理及其调整步骤有一定的了解和掌握，才能充分发挥显微镜应有的功能，拍出来的照片才能在效果上比较一致而又完善。柯勒照明系统的原理简单来说就是：光源发光体上任意一点发出的光，可以照明显微镜的视域范围，而光源发光体上每一点所发出的光汇集起来，在显微镜的视域中就实现了非常充分而又均匀的照明。调整柯勒照明系统的目的，是为了使所观察的视域能获得均匀而又充分的照明，防止杂散光对照像系统造成影响或干扰，以免照像时在底片形成灰雾。高调整柯勒照明系统的必要部件：视场光阑、可进行合轴调整的聚光镜系统。
① 选用10×物镜和10×目镜
② 把聚光镜前端透镜摆进光路中，孔径光阑调至适中的位置上（不大不小），再把聚光镜升到*顶的位置上，聚光镜转盘调至明视野“J”位置
③ 把视场光阑调至*小（0.1）
④ 载物台上放上已封片的生物样品，开亮光源，调焦清晰
⑤ 视域中会出现一个局部照明的区域或亮斑，这是视场光阑的模糊像，在其中可以清晰地看到样品的细节；在它之外是较暗的视域，不一定能把样品的细节看得清楚
⑥把聚光镜微微地向下调，使视野中的亮斑逐渐收小，慢慢变成一个清晰的多边形象，这便是视场光阑的清晰像；
⑦一般情况下，多边形象并不在视域中央，需要调整聚光镜的一对调中螺丝，把视场光阑多边形的像调至中央位置；
⑧逐渐开大视场光阑，使多边形象成为视域的内接多边形，进一步核对调中的状况，如对中不够理想，继续微微调对中螺丝；
⑨将视场光阑稍为再微微开大一些，使它的多边形象恰好消失在视域的边缘上，至此，柯勒照明系统调整完毕。柯勒照明系统调整好以后，整个视域照明均匀，拍摄的显微照片明亮清晰，反差正常。在日后使用过程中应特别注意： a. 视场光阑不可任意开大，但可随物镜倍数的增大而将视场光阑收小，随物镜倍数的减小而开大； b. 聚光镜的高低位置不准乱调，否则会破坏已调整好的柯勒照明系统； c. 使用10×以下物镜时要将聚光镜前端透镜摆出光路外，使用10×或10×以上物镜时要将前端透镜摆入光路中； d. 关于物镜倍数与视场光阑大小配合问题，在实际使用过程中，作为一般观察不一定要收小或开大视场光阑，但作显微照相时，为了避免杂散光线对照相系统的干扰，以便能拍摄到较完善的照片，则应在使用每一个倍数的物镜时，把视场光阑调节到正好消失于所观察的视域边上，这是比较繁复的工作，但又非做不可。较为简便的方法是把与各个倍数物镜相对应的视场光阑事先调整好，并作好记号，以后使用时根据记号直接调至相应的位置。


4．孔径光阑的正确使用　由于聚光镜的孔径光阑可以影响显微镜的分辨率，使用时应掌握正确的使用方法。过去由于对孔径光阑的认识不足，往往把它当作是调节视野亮度的工具。虽然调节孔径光阑在一定程度上可以改变视野的亮度，但会直接影响成像的反差、对比度及分辨率，在使用过程中应尽可能避免。为了发挥聚光镜孔径光阑的作用，以便在观察时，尤其在作显微照相时获得*佳分辨率，在每换用一个倍数的物镜时，在样品调焦清晰后，需要调节孔径光阑，使它的大小正好等于所用物镜数值孔径（物镜孔径像）的2/3 。调整方法是用对中望远镜对焦于视野中黑色相差环上，调节孔径光阑，可以看到一个多边形的孔径光阑像，然后调到等于物镜孔径像的2/3，即介于黑色相差环外与圆形视域内之间。为方便起见，可把与各倍数物镜相对应的孔径光阑预先调整好，并作好标记，以免每次使用都要重新调整。